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    人磷脂酰絲氨酸抗體(PS-Ab)Elisa試劑盒說明書

    發(fā)布時(shí)間: 2011-09-16  點(diǎn)擊次數(shù): 1412次

    人磷脂酰絲氨酸抗體(PS-Ab)Elisa試劑盒說明書
    本試劑盒僅供研究使用。
    檢測范圍: 96T
    0.2ng/ml - 6ng/ml
    使用目的:
    本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中磷脂酰絲氨酸抗體(PS Ab)含量。
    實(shí)驗(yàn)原理
    人磷脂酰絲氨酸抗體(PS Ab)Elisa試劑盒說明書
    本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人磷脂酰絲氨酸抗體(PS Ab)水平。用純化的
    人磷脂酰絲氨酸(PS)抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入磷
    脂酰絲氨酸抗體(PS Ab),再與HRP 標(biāo)記的磷脂酰絲氨酸(PS)抗原結(jié)合,形成抗原-抗體
    -酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,
    并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的磷脂酰絲氨酸抗體(PS Ab)呈
    正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人磷脂
    酰絲氨酸抗體(PS Ab)濃度。
    試劑盒組成
    1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
    2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(12 ng/ml) 0.5ml×1 瓶
    3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
    4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
    5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
    6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
    標(biāo)本要求
    1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
    馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步驟
    1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
    釋。
    6ng/ml 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    3ng/ml 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    1.5ng/ml 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    0.75ng/ml 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    0.375ng/ml 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
    待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,
    然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
    量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
    3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
    4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
    重復(fù)5 次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
    7. 溫育:操作同3。
    8. 洗滌:操作同5。
    9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
    15 分鐘.
    10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
    11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止
    液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
    操作程序總結(jié):
    計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
    OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)
    準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
    即為樣品的實(shí)際濃度。
    注意事項(xiàng)
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
    用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
    3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
    控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
    4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
    大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計(jì)
    算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請避光保存。
    7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號組分不得混用。
    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6 個(gè)月人磷脂酰絲氨酸抗體(PS-Ab)Elisa試劑盒說明書

    人磷脂酰絲氨酸抗體(PS-Ab)Elisa試劑盒說明書
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